点突变（point mutation）是突变的一种类型，在遗传材料DNA或RNA中，会使一个碱基核苷酸替换成另一种核苷酸。通常这个术语也包括只作用于单一碱基对的插入或删除。

广义上，点突变可以是碱基替换，单碱基插入或碱基缺失；狭义上，点突变也称作单碱基替换（basesubstitution）。碱基替换又分为转换（transitions）和颠换（transversions）两类。

点突变在多个领域发挥作用，在基础科研研究中，顺利获得引入特定点突变，研究基因或蛋白质的功能域；在研究疾病机制和模型构建上，可以重现驱动突变，探索肿瘤发生或耐药性；在药物开发和筛选领域，可以做药物敏感性测试，筛选针对特定突变的候选药物。

常见的点突变构建方法有以下三种：

碱基编辑系统主要基于融合的脱氨酶类型分为两大类：胞嘧啶碱基编辑器（CBE）和腺嘌呤碱基编辑器（ABE）。

CBE系统顺利获得融合胞嘧啶脱氨酶，可在不引起DNA双链断裂（DSB）的情况下，将靶位点范围内的胞嘧啶（C）脱氨基转化为尿嘧啶（U），最终经DNA修复或复制实现C→T（或C→G）的碱基转换。

而ABE系统当融合蛋白在sgRNA的引导下靶向基因组DNA时，腺嘌呤脱氨酶可结合到ssDNA上，将一定范围内的腺嘌呤(A)脱氨变成肌苷(I)，I在DNA水平会被当做G进行读码与复制，最终实现A-T碱基对至G-C碱基对的直接替换。

碱基编辑器的优缺点：碱基编辑器不需要依赖DNA双链断裂（DSB）,所以突变效率较高。由于脱氨酶无特异性，可能导致PAM（4-7位）附近碱基无差别突变。碱基替换种类较少，无法任意转换碱基。

①RNP法是将gRNA和Cas9蛋白在体外形成RNP复合物，再与单链Oligo共转染进细胞，由RNP复合物对基因组靶点进行识别与切割，再以单链Oligo为模板进行同源重组修复，实现基因点突变。这种方法适用性广，编辑效率高，流程简单，项目周期短。

②质粒抗性法是使用gRNA和Cas9共表达的质粒，与Donor质粒一起共转染细胞。Donor质粒两条同源臂中间构建了一个两端带有loxp重组位点的抗性基因表达盒，目标点突变则顺利获得同源臂引入。这种方法受突变点位置的限制较小，顺利获得抗性筛选，可以提高阳性率。

③AAV-Donor法是以AAV作为载体带入Donor模板进行同源修复。AAV基因组是游离的DNA单链，而且在细胞内可以保留较长时间，可以大幅提升同源重组效率。这种方法适用于悬浮细胞等难转染的细胞系。

Prime Editing能够实现在不依赖DNA双链断裂（DSB）和外源供体DNA模板的情况下，实现靶向性的点突变、小片段插入或缺失。

Prime Editing的基本原理：第一时间，pegRNA中的spacer结合编辑链，使pegRNA+ncas9-RT定位于基因组上；随后，nCas9发挥其单链切割功能，在非靶向链上产生切口；接着，PBS与DNA模板结合，逆转录酶以PBS为引物，RTT为模板，合成编辑链；此时这时切口上出现2种不同的序列，一条是带有目标突变的DNA，一条是原DNA链，这2条链竞争性的结合在靶向链上，形成3’或5‘flap；最后，若带有目的突变的DNA链结合在靶向链上，则出现DNA互补不配对的情况，此时进行错配修复机制，将DNA链修复为目的编辑序列或原来的序列。